Jensen Ross Ackles Shaffer, nació el 1 de marzo de 1978, en la ciudad de Dallas, Texas (USA), pero se crió en Richardson, Texas. Sus padres son Alan Ackles, actor de profesión, y Donna Shaffer. Le pusieron el nombre Jensen ya que encontraban que era un nombre muy poco común.
Jensen tiene decendencia Irlanedsa y Británica.
Ackles tiene un hermano 3 años mayor, Joshua, y una hermana, Mackenzie, 7 años menor.
Se graduó de la Dartmouth Elementary School en el año 1990, en 1993 se graduó de la Apollo Junior High School, y de la Lloyd V. Berkner High School en 1996. A él le gustaba jugar béisbol en el instituto.
Jensen pensaba estudiar medicina deportiva en la Texas Tech University y convertirse en un terapeuta físico antes de mudarse a Los Ángeles y comenzar su carrera como actor.
Después de ejercer su carrera como modelo desde muy joven, Jensen empezó a concentrarse en su carrera como actor en el año 1996. Apareció en muchos papeles como invitado en distintas series antes de integrarse en el año 1997 a la serie "Days of our lives" transmitida por la cadena NBC, interpretando a Eric Brady. Fue muy elogiado por éste papel, consiguiendo 3 nominaciones a los Emmy (1998, 1999, 2000) y ganando el Soap Opera Digest Award por Mejor Actor Nuevo en 1998.
Después de abandonar "Days Of Our Lives" en el 2000, Jensen apareció en la mini-serie "Blonde", sobre la vida de Marilyn Monroe, actuando junto a Poppy Montgomery y Patrick Dempsey.
Ackles participó también en la exitosa serie "Dawson's Creek" e interpretó a Alec en la segunda temporada de la serie Dark Angel.
En el año 2000, Jensen audicionó para el papel de Clark Kent en la serie "Smallville", sin embargo no lo consiguió. Aunque en el año 2004 fue llamado para actuar en la 4° temporada de la serie interpretando a Jason Teague.
Volvió a la televisión en el año 2005, en la nueva serie de drama/terror de WB "Supernatural", interpretando a Dean Winchester, quien junto con su hermano Sam (Jared Padalecki) viajan a través del país buscando fenómenos paranormales. La serie se transmite hasta el día de hoy.
Jensen trabajó también en la película "Devour" y "Ten Inch Hero".